Javascript у цяперашні час адключаны ў вашым браўзеры. Некаторыя функцыі гэтага сайта не будуць працаваць, калі javascript адключаны.
Зарэгіструйцеся, указаўшы свае канкрэтныя дадзеныя і канкрэтны прэпарат, які вас цікавіць, і мы супаставім прадстаўленую вамі інфармацыю з артыкуламі ў нашай шырокай базе дадзеных і неадкладна дашлем вам копію ў фармаце PDF па электроннай пошце.
Гранулы Ban-Lan-Gen аслабляюць хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы дэкстран-сульфатам натрыю, у мышэй, шляхам мадуляцыі мікрабіёты кішачніка і аднаўлення прадукцыі кішачных SCFA, атрыманых з GLP-1.
Цзяо Пэн,1-3,*Лі Сі,4,*Чжэн Лінь,3,5 Дуань Ліфан,1 Гао Чжэнсянь,2,5 Дзіеху,1 Лі Цзе,6 Лі Сяафэн,6 Шэнь Сянчунь,5 Сяо Хайтао21Фармацэўтычны факультэт Шэньчжэньскай бальніцы Пекінскага ўніверсітэта, Шэньчжэнь, Кітайская Народная Рэспубліка; 2Фармацэўтычны факультэт Цэнтра навуковых даследаванняў здароўя Шэньчжэньскага ўніверсітэта, Шэньчжэнь, Кітайская Народная Рэспубліка; 3Навукова-даследчы цэнтр інжынерных тэхналогій этнічнай медыцыны і традыцыйнай кітайскай медыцыны Гуйчжоускага медыцынскага ўніверсітэта, Міністэрства адукацыі, Ключавая фармацэўтычная лабараторыя правінцыі Гуйчжоу, Гуйчжоускі медыцынскі ўніверсітэт, Гуйян, Кітайская Народная Рэспубліка; 4 Кафедра гастраэнтэралогіі, Шэньчжэньская бальніца Пекінскага ўніверсітэта, Шэньчжэнь, Кітайская Народная Рэспубліка; 5Фармацэўтычны факультэт, Гуйчжоускі медыцынскі ўніверсітэт, Дзяржаўная ключавая лабараторыя функцый і прымянення лекавых раслін, Гуйян; 6 Кафедра лабараторнай медыцыны, Шэньчжэньская бальніца Пекінскага ўніверсітэта, Шэньчжэнь, Кітай [email protected] Шэнь Сянчунь, Фармацэўтычны факультэт, Гуйчжоускі медыцынскі ўніверсітэт, Гуйчжоу, Кітайская Народная Рэспубліка, 550004, электронная пошта [email protected] Мэта: Тэрапія на аснове GLP-1 — гэта новы варыянт лячэння запаленчых захворванняў кішачніка. Гранулы Ban-Lan-Gen (BLG) — гэта вядомая антывірусная прэпаратавая форма ТКМ, якая праяўляе патэнцыйную супрацьзапаленчую актыўнасць пры лячэнні розных запаленчых станаў. Аднак яе супрацьзапаленчы эфект пры каліце ​​і механізм дзеяння да гэтага часу незразумелыя. МЕТАДЫ: Вызначыць хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы дэкстрансульфатам натрыю (DSS), у мышэй. Для ацэнкі ахоўнага эфекту BLG былі вызначаны індэксы актыўнасці захворвання, гісталагічныя маркеры пашкоджання і ўзровень прозапаленчых цытакінаў. Уплыў BLG на мікрабіёту кішачніка і кішачнік характарызаваўся ўзроўнем GLP-1 у сыроватцы крыві і экспрэсіяй Gcg, GPR41 і GRP43 у тоўстай кішцы, складам мікрабіёты кішачніка, узроўнем SCFA з калам і вызваленнем GLP-1 з Першасныя клеткі тоўстай кішкі мышэй, якія атрымліваюць выпрацоўку GLP-1, атрыманага з дапамогай SCFA. Вынікі: лячэнне BLG значна знізіла страту масы цела, DAI, скарачэнне тоўстай кішкі, пашкоджанне тканіны тоўстай кішкі і ўзровень прозапаленчых цытакінаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тканіны тоўстай кішкі. Акрамя таго, лячэнне BLG можа значна аднавіць экспрэсію Gcg, GPR41 і GRP43 у тоўстай кішцы і ўзровень GLP-1 у сыроватцы крыві ў мышэй з калітам, павялічваючы колькасць бактэрый, якія выпрацоўваюць SCFA, такіх як Akkermansia і Prevotellaceae_UCG-001, і зніжаючы колькасць бактэрый, такіх як Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas і Oscillibacter. Акрамя таго, лячэнне BLG можа значна павялічыць узровень SCFA ў фекаліях мышэй з калітам. У той жа час, эксперыменты in vitro таксама паказалі, што экстракт фекаліяў мышэй, якія атрымлівалі BLG, можа значна стымуляваць вылучэнне GLP-1 першаснымі дробнымі клеткамі тоўстай кішкі мышэй. Высновы: Гэтыя вынікі сведчаць аб тым, што BLG мае супрацькалітычны эфект. BLG мае патэнцыял для распрацоўкі ў якасці тэрапіі, прынамсі часткова шляхам мадуляцыі мікрабіёты кішачніка і аднаўлення выпрацоўкі GLP-1, атрыманага з кішачных SCFA. Перспектыўныя прэпараты для лячэння хранічнага рэцыдывавальнага каліту. Ключавыя словы: каліт, гранулы Ban-Lan-Gen, мікрабіёта кішачніка, кароткаланцуговыя тоўстыя кіслоты, GLP-1.
Язвавы каліт (ЯК) — гэта хранічнае запаленчае захворванне тоўстай і прамой кішкі, якое характарызуецца рэцыдывавальнай дыярэяй, болем у жываце, стратай вагі і слізіста-гнойным крывавым крэслам.1 Апошнім часам распаўсюджанасць ЯК расце ў краінах з раней нізкай распаўсюджанасцю, у тым ліку ў Кітаі, з ростам папулярнасці заходняга ладу жыцця.2 Гэта павелічэнне стварае сур'ёзныя праблемы для грамадскага здароўя і мае сур'ёзныя наступствы для працаздольнасці пацыентаў і якасці жыцця. Прыкметна, што патагенез ЯК застаецца ў значнай ступені незразумелым, але агульнапрызнана, што генетыка, фактары навакольнага асяроддзя, мікрабіёта кішачніка і імунная сістэма спрыяюць развіццю ЯК.3 Нават цяпер няма лекаў ад ЯК, і мэтай лячэння з'яўляецца клінічны кантроль клінічных сімптомаў, выкліканне і падтрыманне рэмісіі, садзейнічанне гаенню слізістай абалонкі і зніжэнне рэцыдываў. Класічныя метады лячэння ўключаюць амінасаліцылаты, кортікостероіды, імунасупрэсанты і біялагічныя прэпараты. Аднак гэтыя прэпараты не могуць дасягнуць жаданага эфекту з-за розных пабочных эфектаў.4 Нядаўна шматлікія даследаванні выпадкаў паказалі, што традыцыйная кітайская медыцына (ТКМ) прадэманстравала вялікі патэнцыял у палягчэнні ЯК. з нізкай таксічнасцю, што сведчыць аб тым, што распрацоўка новых метадаў традыцыйнай кітайскай медыцыны з'яўляецца перспектыўнай стратэгіяй лячэння НЯК.5-7
Гранулы банлангена (BLG) — гэта прэпарат традыцыйнай кітайскай медыцыны, які вырабляецца з воднага экстракта кораня банлангена.8 Акрамя антывіруснай эфектыўнасці, BLG праяўляе патэнцыйную супрацьзапаленчую актыўнасць пры лячэнні розных запаленчых станаў.9,10 Акрамя таго, з водных экстрактаў Radix isatidis былі выдзелены і ідэнтыфікаваны глюказіналаты (R,S-гойтрын, прогойтрын, эпіпрарубін і глюказід), а таксама нуклеазіды (гіпаксанцін, адэназін, уридын і гуанозін) і алкалоіды індыга, такія як індыга і індырубін.11,12 Папярэднія даследаванні добра пацвердзілі, што злучэнні адэназін, уридын і індырубін праяўляюць магутны супрацькалітычны эфект у розных жывёльных мадэлях каліту.13-17 Аднак даследаванняў, заснаваных на доказах, для ацэнкі эфектыўнасці BLG пры каліце ​​не праводзілася. У дадзеным даследаванні мы даследавалі ахоўны эфект BLG на хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы дэкстрансульфатам натрыю (DSS), у мышэй C57BL/6 і выявілі... што пероральное ўвядзенне BLG значна аслабляе выкліканае DSS хранічнае рэцыдывавальнае запаленне тоўстай кішкі ў мышэй, яго рэгуляторныя механізмы звязаны з мадуляцыяй мікрабіёты кішачніка і аднаўленнем выпрацоўкі глюкагонападобнага пептыду-1 (GLP-1), атрыманага з кішачніка.
Гранулы BLG (без цукру, зацверджаныя NMPA Z11020357; Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd., Пекін, Кітай; нумар партыі: 20110966) былі набыты ў аптэках. DSS (малекулярная маса: 36 000–50 000 дальтон) быў набыты ў MP Biologicals (Санта-Ана, ЗША). Сульфасалазін (SASP) (чысціня ≥ 98%), гематаксілін і эазін былі набыты ў Sigma-Aldrich (Сэнт-Луіс, Місуры, ЗША). Наборы для аналізу мышэй TNF-α, IL-1β і IL-6 luminex Elisa былі набыты ў R&D systems (Мінеапаліс, Мінесота, ЗША). Воцатная кіслата, прапіёнавая кіслата і масляная кіслата былі набыты ў Aladdin Industries (Шанхай, Кітай). 2-этылмасляная кіслата была набыта ў Merck KGaA (Дармштадт, Германія).
6-8-тыднёвыя самцы мышэй C57BL/6 (маса цела 18-22 г) былі набыты ў Beijing Wetahe Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Пекін, Кітай) і ўтрымліваліся ў асяроддзі з тэмпературай 22 ± 2 °C з 12-гадзінным цыклам святло/цемра. Мышы атрымлівалі стандартны рацыён для грызуноў з вольным доступам да пітной вады на працягу аднаго тыдня для акліматызацыі да новага асяроддзя. Затым мышы былі выпадковым чынам падзелены на чатыры групы: кантрольная група, мадэльная група DSS, група, якая атрымлівала SASP (200 мг/кг, перорально) і група, якая атрымлівала BLG (1 г/кг, перорально). Як паказана на малюнку 1A, згодна з нашым папярэднім даследаваннем, эксперыментальны хранічны рэцыдывавальны каліт быў выкліканы ў мышэй трыма цыкламі 1,8% DSS на працягу 5 дзён, а затым дыстыляванай вадой на працягу 7 дзён, згодна з нашым папярэднім даследаваннем.18 Мышы ў групах, якія атрымлівалі SASP і BLG, атрымлівалі SASP і BLG адпаведна кожны дзень, пачынаючы з 0-га дня. Згодна з папярэднімі эксперыментамі, доза BLG складала устаноўлена на ўзроўні 1 г/кг. Тым часам доза SASP была ўстаноўлена на ўзроўні 200 мг/кг, згодна з літаратурай.4 Кантрольная група і мадэль DSS атрымлівалі аднолькавы аб'ём вады на працягу ўсяго эксперыменту.
Малюнак 1. БЛГ паляпшае хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы DSS, у мышэй. (A) Эксперыментальная планіроўка хранічнага рэцыдывавальнага каліту і лячэнне, (B) змяненне масы цела, (C) паказчык індэкса актыўнасці захворвання (DAI), (D) даўжыня тоўстай кішкі, (E) рэпрэзентатыўны малюнак тоўстай кішкі, (F) афарбоўванне H&E тоўстай кішкі (павелічэнне, ×100) і (G) гісталагічны паказчык. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 6).##p < 0,01 або ###p < 0,001 у параўнанні з кантрольнай групай (Con); *p < 0,05 або **p < 0,01 або ***p < 0,001 у параўнанні з групай DSS.
Штодзённа фіксавалі вагу цела, кансістэнцыю кала і рэктальнае крывацёк. Індэкс актыўнасці захворвання (ІАХ) вызначаўся шляхам аб'яднання балаў па вазе цела, кансістэнцыі кала і рэктальным крывацёку, як апісана раней.19 У канцы эксперыменту ўсіх мышэй падвергнулі эўтаназіі, а кроў, кал і тоўстую кішку сабралі для далейшых эксперыментаў.
Тканка тоўстай кішкі была фіксаваная фармалінам і заліта ў парафін. Былі зроблены 5-мікронныя зрэзы і афарбаваны гематаксілін-эазінам (H&E), затым аслеплены і ацэнены, як апісана раней.19
Агульная РНК тканіны тоўстай кішкі была экстрагаваная з дапамогай рэагента Trizol (Invitrogen, Карлсбад, Каліфорнія), а затым экстрагаваная кДНК з дапамогай зваротнай транскрыптазы (TaKaRa, Кусацу, Шыга, Японія). Колькасная ПЦР была праведзена з выкарыстаннем сістэмы ПЦР у рэжыме рэальнага часу з SYBR Green Master (Roche, Базель, Швейцарыя). Транскрыпты мэтавых генаў былі нармалізаваны да β-акціну, і дадзеныя былі прааналізаваны з выкарыстаннем метаду 2-ΔΔCT. Паслядоўнасці праймераў генаў паказаны ў табліцы 1.
Першаснае вылучэнне і культываванне клетак тоўстай кішкі мышэй праводзілі, як апісана раней.20 Карацей кажучы, тоўстую кішку мышэй ва ўзросце 6-8 тыдняў спачатку выразалі пасля забойства шляхам дыслакацыі шыйкі маткі, затым падоўжна ўскрывалі, апрацоўвалі збалансаваным саляным растворам Хэнкса (HBSS, без кальцыя і магнію) і наразалі на дробныя кавалачкі таўшчынёй 0,5-1 мм. Пасля гэтага тканіны пераварвалі 0,4 мг/мл калагеназы XI (Sigma, Пул, Вялікабрытанія) у вольным асяроддзі DMEM і цэнтрыфугавалі пры 300 xg на працягу 5 хвілін пры пакаёвай тэмпературы. Рэсуспендавалі асадак у асяроддзі DMEM (з даданнем 10% фетальнай бычынай сыроваткі, 100 адзінак/мл пеніцыліну і 100 мкг/мл стрэптаміцыну) пры тэмпературы 37 °C і прапускалі праз нейлонавую сетку (памер пор ~250 мкм). Аліквоты клетак тоўстай кішкі змяшчалі ў шкляныя чашкі і інкубавалі з воцатнай кіслатой, прапіёнавай кіслатой, маслянай кіслатой і экстрактамі мышыных фекаліяў на працягу 2 гадзін пры 37°C, 5% CO2.
Тканіну тоўстай кішкі гамагенізавалі з дапамогай PBS, і ўзроўні цытакінаў IL-6, TNF-α і IL-1β у тканіне тоўстай кішкі вызначалі з дапамогай набораў для аналізу luminex ELISA (R&D systems, Мінеапаліс, Мінесота, ЗША). Аналагічна, узроўні GLP-1 у сыроватцы крыві і культуральным асяроддзі першасных клетак тоўстай кішкі мышэй вызначалі з дапамогай набору ELISA (Bioswamp, Ухань, Кітай) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы.
Агульную ДНК з фекаліяў вылучалі з выкарыстаннем набору для экстракцыі ДНК (Tiangen, Кітай). Якасць і колькасць ДНК вымяралі пры суадносінах 260 нм/280 нм і 260 нм/230 нм адпаведна. Пасля гэтага, выкарыстоўваючы кожную выдзеленую ДНК у якасці матрыцы, спецыфічныя праймеры 338F (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG) і 806R (GGACTACHVGGGTWTCTAAT) выкарыстоўвалі для ампліфікацыі рэгіёнаў V3-V4 гена 16S рРНК у розных рэгіёнах. Прадукты ПЛР ачышчалі з выкарыстаннем набору для экстракцыі гелю QIAquick (QIAGEN, Германія), колькасна вызначалі з дапамогай ПЛР у рэжыме рэальнага часу і секвенавалі з выкарыстаннем платформы секвенавання IlluminaMiseq PE300 (Illumina Inc., Каліфорнія, ЗША). Для біяінфарматычнага аналізу апрацоўка дадзеных праводзілася ў адпаведнасці з раней апісанымі пратаколамі.21,22 Карацей кажучы, выкарыстоўвалі Cutadapt (V1.9.1) для фільтрацыі неапрацаваных экспрэс-файлаў. OTU кластарызавалі з выкарыстаннем UPARSE (версія 7.0.1001) з парогам падабенства 97%, а для выдалення хімерных паслядоўнасцей выкарыстоўваўся метад UCHIME. Аналіз складу супольнасці і класіфікацыя былі праведзены з выкарыстаннем класіфікатара RDP (http://rdp.cme.msu.edu/) на аснове базы дадзеных генаў рыбасомнай РНК SILVA.
Узровень кароткаланцуговых тоўстых кіслот (воцатнай кіслаты, прапіёнавай кіслаты і маслянай кіслаты) вымяралі, як апісана раней Тао і інш., з некаторымі мадыфікацыямі.23 Карацей кажучы, 100 мг фекаліяў спачатку суспендавалі ў 0,4 мл дэіянізаванай вады, затым у 0,1 мл 50% сернай кіслаты і 0,5 мл 2-этылмаслянай кіслаты (унутраны стандарт), затым гамагенізавалі і награвалі пры 4°C. Цэнтрыфугавалі пры 12 000 абаротаў у хвіліну на працягу 15 хвілін пры тэмпературы 50°C. Супернатант экстрагавалі 0,5 мл эфіру і ўводзілі ў газавы кампрэсар для аналізу. Для газавай храматаграфіі (ГХ) узоры аналізавалі з выкарыстаннем газавага храматографа GC-2010 Plus (Shimadzu, Inc.), абсталяванага дэтэктарам іанізацыі полымя (FID). Падзел праводзілі з выкарыстаннем калоны ZKAT-624, 30 м × 0,53 мм × 0,3 мкм (Lanzhou Zhongke Antai Analytical Technology Co., Ltd., Кітай). Дадзеныя атрымлівалі з выкарыстаннем праграмнага забеспячэння для раствораў ГХ (Shimadzu, Inc.). Каэфіцыент падзелу складаў 10:1, газ-носьбітам быў азот, а хуткасць патоку — 6 мл/мін. Аб'ём уводу складаў 1 ​​мкл. Тэмпература інжэктара і дэтэктара складала 300°C. Тэмпература печы падтрымлівалася на ўзроўні 140°C на працягу 13,5 хвілін, затым павялічвалася да 250°C са хуткасцю 120°C/мін; тэмпература трымалася на працягу 5 хвілін.
Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± стандартная памылка сярэдняга (SEM). Значнасць даных ацэньвалася з дапамогай аднафактарнага дысперсійнага аналізу (ANOVA) з наступным выкарыстаннем множнага дыяпазону тэсту Дункана. Для ўсіх разлікаў выкарыстоўвалася праграмнае забеспячэнне GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., Сан-Дыега, Каліфорнія, ЗША), і значэнне p < 0,05 лічылася статыстычна значным.
Добра вядома, што НЯК — гэта хранічнае рэцыдывавальнае захворванне каліту з моцным болем у жываце, дыярэяй і крывацёкам. Таму для ацэнкі эфектыўнасці BLG у барацьбе з калітам быў вызначаны хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы DSS, у мышэй (мал. 1A). У параўнанні з кантрольнай групай, у мышэй у мадэльнай групе DSS назіралася значнае зніжэнне масы цела і больш высокі DAI, і гэтыя змены былі значна адменены пасля 24 дзён лячэння BLG (мал. 1B і C). Скарачэнне тоўстай кішкі з'яўляецца важнай адметнай рысай НЯК. Як паказана на малюнках 1D і E, даўжыня тоўстай кішкі мышэй, якія атрымлівалі DSS, была значна скарочана, але лячэнне BLG палегчыла яе стан. Пасля гэтага быў праведзены гістапаталагічны аналіз для ацэнкі запалення тоўстай кішкі. Выявы, афарбаваныя H&E, і паталагічныя балы паказалі, што ўвядзенне DSS значна парушае архітэктуру тоўстай кішкі і прыводзіць да разбурэння крыпт, тады як лячэнне BLG значна зніжае разбурэнне крыпт і паталагічныя балы (мал. 1F і G). Прыкметна, што ахоўны эфект BLG у дозе 1 г/кг быў параўнальны з ахоўным эфектам SASP у дозе 200 мг/кг. У цэлым, гэтыя вынікі сведчаць аб тым, што BLG эфектыўны ў зніжэнні цяжкасці хранічнага рэцыдывавальнага каліту, выкліканага DSS, у мышэй.
TNF-α, IL-1β і IL-6 з'яўляюцца важнымі запаленчымі маркерамі запалення тоўстай кішкі. Як паказана на малюнку 2А, DSS выклікаў значнае павелічэнне экспрэсіі генаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тоўстай кішцы ў параўнанні з кантрольнай групай. Увядзенне BLG можа значна змяніць гэтыя змены, апасродкаваныя DSS. Далей мы выкарысталі ELISA для вызначэння ўзроўняў запаленчых цытакінаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тканіны тоўстай кішкі. Вынікі таксама паказалі, што ўзровень TNF-α, IL-1β і IL-6 у тоўстай кішцы быў значна павялічаны ў мышэй, якія атрымлівалі DSS, тады як лячэнне BLG палегчыла гэта павелічэнне (малюнак 2B).
Малюнак 2. BLG інгібіруе экспрэсію генаў і выпрацоўку прозапаленчых цытакінаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тоўстай кішцы мышэй, якія атрымлівалі DSS. (A) Экспрэсія генаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тоўстай кішцы; (B) узровень бялку TNF-α, IL-1β і IL-6 у тоўстай кішцы. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 4–6). #p < 0,05 або ##p < 0,01 або ###p < 0,001 у параўнанні з кантрольнай (Con) групай; *p < 0,05 або **p < 0,01 у параўнанні з групай DSS.
Кішачны дысбіёз мае вырашальнае значэнне ў патагенезе НЯК.24 Каб даследаваць, ці BLG мадулюе мікрабіёту кішачніка мышэй, якія атрымлівалі DSS, было праведзена секвенаванне 16S рРНК для аналізу бактэрыяльнай супольнасці змесціва кішачніка. Дыяграма Вена паказвае, што тры групы маюць 385 агульных OTU. У той жа час кожная група мела ўнікальныя OTU (мал. 3A). Акрамя таго, індэкс Chao1 і індэкс Шэнана, паказаныя на малюнках 3B і C, паказалі, што разнастайнасць супольнасці мікрабіёты кішачніка была зніжана ў мышэй, якія атрымлівалі BLG, у той час як індэкс Шэнана быў значна зніжаны ў групе, якая атрымлівала BLG. Аналіз галоўных кампанентаў (PCA) і аналіз галоўных каардынат (PCoA) былі выкарыстаны для вызначэння заканамернасцей кластэрызацыі паміж трыма групамі і паказалі, што структура супольнасці мышэй, якія атрымлівалі DSS, была выразна аддзелена пасля лячэння BLG (малюнак 3D і E). Гэтыя дадзеныя сведчаць аб тым, што лячэнне BLG значна паўплывала на структуру супольнасці мышэй з калітам, выкліканым DSS.
Малюнак 3. БЛГ змяняе разнастайнасць мікрабіёты кішачніка ў мышэй з калітам, выкліканым DSS. (A) Дыяграма Вена OTU, (B) індэкс Chao1, (C) індэкс багацця Шэнана, (D) графік балаў OTU па выніках аналізу галоўных кампанент (PCA), (E) бал па выніках аналізу галоўных каардынат (PCoA) OTU. Малюнак. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 6).**p < 0,01 у параўнанні з групай DSS.
Каб ацаніць спецыфічныя змены ў фекальнай мікрабіёце, мы прааналізавалі склад кішачнай мікрабіёты на ўсіх таксанамічных узроўнях. Як паказана на малюнку 4А, асноўнымі тыпамі ва ўсіх групах былі Firmicutes і Bacteroidetes, за імі ішлі Verrucomicrobia. Адносная колькасць Firmicutes і суадносіны Firmicutes/Bacteroidetes былі значна павялічаны ў фекальных мікробных супольнасцях мышэй, якія атрымлівалі DSS, у параўнанні з кантрольнымі мышамі, і гэтыя змены былі значна адменены пасля лячэння BLG. У прыватнасці, лячэнне BLG значна павялічыла адносную колькасць Verrucobacterium у фекаліях мышэй з калітам, выкліканым DSS. На ўзроўні хатніх гаспадарак фекальныя мікробныя супольнасці былі заняты Lachnospiriaceae, Muribaculaceae, Akkermansiaceae, Ruminococcaceae і Prevotellaceae (мал. 4B). У параўнанні з групай DSS, знясіленне BLG павялічыла колькасць Akkermansiaceae, але знізіла колькасць Lachnospiraceae і Ruminococcaceae. Характэрна, што на ўзроўні роду... Фекальная мікрабіёта была занятая Lachnospira_NK4A136_group, Akkermansia і Prevotellaceae_UCG-001 (мал. 4C). Гэта адкрыццё таксама паказала, што лячэнне BLG эфектыўна змяняе дысбаланс мікрабіёты ў адказ на заражэнне DSS, які характарызуецца зніжэннем колькасці Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas і Oscillibacter, а таксама павелічэннем колькасці Akkermansia і Prevotellaceae_UCG-001.
Малюнак 4. BLG змяняе колькасць кішачнай мікрабіёты ў мышэй з калітам, выкліканым DSS. (A) Колькасць кішачнай мікрабіёты на ўзроўні тыпу; (B) Колькасць кішачнай мікрабіёты на ўзроўні сямейства; (C) Колькасць кішачнай мікрабіёты на ўзроўні роду. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 6).#p < 0,05 або ###p < 0,001 у параўнанні з кантрольнай (Con) групай; *p < 0,05 або **p < 0,01 або ***p < 0,001 у параўнанні з групай DSS.
Улічваючы, што кароткаланцуговыя тоўстыя кіслоты (КЛТК) з'яўляюцца асноўнымі метабалітамі Akkermansia і Prevotellaceae_UCG-001, у той час як ацэтат, прапіянаты і бутыраты з'яўляюцца найбольш распаўсюджанымі КЛТК у прасвете кішачніка,25-27 мы ўсё яшчэ знаходзімся ў канцы нашага даследавання.Як паказана на малюнку 5, канцэнтрацыі ацэтату, прапіянату і бутырату ў кале былі значна зніжаны ў групе, якая атрымлівала DSS, у той час як лячэнне BLG магло ў значнай ступені падавіць гэта зніжэнне.
Малюнак 5. БЛГ павялічвае ўзровень SCFA ў фекаліях мышэй з калітам, выкліканым DSS. (A) Змест воцатнай кіслаты ў фекаліях; (B) змест прапіёнавай кіслаты ў фекаліях; (C) змест алейнай кіслаты ў фекаліях. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 6). #p < 0,05 або ##p < 0,01 у параўнанні з кантрольнай (Con) групай; *p < 0,05 або **p < 0,01 у параўнанні з групай DSS.
Далей мы разлічылі каэфіцыент карэляцыі Пірсана паміж дыферэнцыяльнымі SCFA на ўзроўні роду і фекальнай мікрабіётай. Як паказана на малюнку 6, Akkermansia станоўча карэлявала з выпрацоўкай прапіёнавай кіслаты (Пірсан = 0,4866) і маслянай кіслаты (Пірсан = 0,6192). Наадварот, як Enteromonas, так і Oscillobacter адмоўна карэлявалі з выпрацоўкай ацэтату, з каэфіцыентамі Пірсана 0,4709 і 0,5104 адпаведна. Аналагічна, Ruminococcaceae_UCG-014 адмоўна карэляваў з выпрацоўкай прапіёнавай кіслаты (Пірсан = 0,4508) і маслянай кіслаты (Пірсан = 0,5842) адпаведна.
Малюнак 6. Карэляцыйны аналіз Пірсана паміж дыферэнцыяльнымі КЛТК і мікробамі тоўстай кішкі. (A) Энтеромонада з воцатнай кіслатой; (B) Бацыла страсення мозгу з воцатнай кіслатой; (C) Акермансія супраць прапіёнавай кіслаты; (D) Румінакок_UCG-014 з прапіёнавай кіслатой; (E) Акермансія з маслянай кіслатой; (F) Румінакок_UCG-014 з маслянай кіслатой.
Глюкагон-падобны пептыд-1 (GLP-1) — гэта спецыфічны для тыпу клетак посттрансляцыйны прадукт проглюкагона (Gcg) з супрацьзапаленчымі ўласцівасцямі.28 Як паказана на малюнку 7, DSS выклікала значнае зніжэнне экспрэсіі мРНК Gcg. Апрацоўка тоўстай кішкі і BLG магла значна змяніць зніжэнне Gcg, выкліканае DSS, у параўнанні з кантрольнай групай (мал. 7A). У той жа час узровень GLP-1 у сыроватцы крыві быў значна зніжаны ў групе, якая атрымлівала DSS, і апрацоўка BLG магла ў значнай ступені прадухіліць гэта зніжэнне (мал. 7B). Паколькі кароткаланцуговыя тоўстыя кішкі могуць стымуляваць сакрэцыю GLP-1 праз актывацыю рэцэптара 43, звязанага з G-бялком (GRP43), і рэцэптара 41, звязанага з G-бялком (GRP41), мы таксама даследавалі GPR41 і GRP43 у тоўстай кішцы мышэй з калітам і выявілі, што экспрэсія мРНК GRP43 і GPR41 у тоўстай кішцы значна знізілася пасля ўздзеяння DSS, і апрацоўка BLG магла эфектыўна выправіць гэта зніжэнне (мал. 7C і D).
Малюнак 7. BLG павялічвае ўзровень GLP-1 у сыроватцы крыві і экспрэсію мРНК Gcg, GPR41 і GRP43 у тоўстай кішцы ў мышэй, якія атрымлівалі DSS. (A) Экспрэсія мРНК Gcg у тканіне тоўстай кішкі; (B) Узровень GLP-1 у сыроватцы крыві; (C) Экспрэсія мРНК GPR41 у тканіне тоўстай кішкі; (D) Экспрэсія мРНК GPR43 у тканіне тоўстай кішкі. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 5–6). #p < 0,05 або ##p < 0,01 у параўнанні з кантрольнай (Con) групай; *p < 0,05 у параўнанні з групай DSS.
Паколькі лячэнне BLG магло павялічыць узровень GLP-1 у сыроватцы крыві, экспрэсію мРНК Gcg у тоўстай кішцы і ўзровень SCFA ў кале ў мышэй, якія атрымлівалі DSS, мы дадаткова даследавалі ацэтат, прапіянат і бутырат, а таксама ў кантрольных (F-Con), мышэй з калітам DSS (F-Con) -DSS) і мышэй, якія атрымлівалі BLG (F-BLG), на вызваленне GLP-1 з першасных клетак тоўстай кішкі мышы. Як паказана на малюнку 8A, першасныя клеткі тоўстай кішкі мышы, апрацаваныя 2 мМ воцатнай кіслатой, прапіёнавай кіслатой і масляной кіслатой адпаведна, значна стымулявалі вызваленне GLP-1, што адпавядае папярэднім даследаванням.29,30 Аналагічна, усе F-Con, F-DSS і F-BLG (эквівалентна 0,25 г фекаліяў) значна стымулявалі вызваленне GLP-1 з першасных клетак тоўстай кішкі мышы. Прыкметна, што колькасць GLP-1, вызваленага першаснымі клеткамі тоўстай кішкі мышы, апрацаванымі F-DSS, была значна ніжэйшай, чым у першасных мышэй, апрацаваных F-Con і F-BLG. клеткі тоўстай кішкі (малюнак 8B). Гэтыя дадзеныя сведчаць аб тым, што лячэнне BLG значна аднавіла выпрацоўку GLP-1, атрыманага з кішачных SCFA.
Малюнак 8. SCFA, атрыманыя з BLG, стымулююць вызваленне GLP-1 з першасных клетак тоўстай кішкі мышэй. (A) Воцатная кіслата, прапіёнавая кіслата і масляная кіслата стымулявалі вызваленне GLP-1 з першасных клетак тоўстай кішкі мышэй; (B) экстракты фекалій F-Con, F-DSS і F-BLG стымулявалі першасныя клеткі тоўстай кішкі мышэй Колькасць вызваленага GLP-1. Аліквоты клетак тоўстай кішкі змяшчалі ў шкляныя чашкі Петры і апрацоўвалі 2 мМ воцатнай кіслатой, прапіёнавай кіслатой, масляной кіслатой і экстрактамі фекалій F-Con, F-DSS і F-BLG (эквівалентна 0,25 г фекалій) адпаведна. 2 гадзіны пры 37°C, 5% CO2 адпаведна. Колькасць GLP-1, вызваленага з першасных клетак тоўстай кішкі мышэй, вызначалі з дапамогай ELISA. Дадзеныя прадстаўлены ў выглядзе сярэдняга значэння ± SEM (n = 3). #p < 0,05 або ##p < 0,01 у параўнанні з пустым або F-Con; *p < 0,05 у параўнанні з F-DSS.
Скарачэнні: Ace — воцатная кіслата; Pro — прапіёнавая кіслата; аднак — масляная кіслата; F-Con — экстракт кала кантрольных мышэй; F-DSS — экстракт кала мышэй з калітам; F-BLG — з тоўстай кішкі, апрацаванай BLG. Экстракты кала запаленчых мышэй.
Сусветная арганізацыя аховы здароўя ўнесла НЯК у спіс рэзістэнтных захворванняў, і ён становіцца глабальнай пагрозай; Аднак эфектыўныя метады прагназавання, прафілактыкі і лячэння гэтага захворвання ўсё яшчэ абмежаваныя. Такім чынам, існуе вострая неабходнасць у вывучэнні і распрацоўцы новых бяспечных і эфектыўных тэрапеўтычных стратэгій для лячэння НЯК. Прэпараты традыцыйнай кітайскай медыцыны з'яўляюцца перспектыўным варыянтам, паколькі многія прэпараты традыцыйнай кітайскай медыцыны паказалі сваю эфектыўнасць у лячэнні НЯК у кітайскага насельніцтва на працягу стагоддзяў, і ўсе яны з'яўляюцца біялагічнымі арганічнымі і натуральнымі матэрыяламі, якія ў асноўным бясшкодныя для людзей і жывёл.31,32 Мэтай гэтага даследавання было знайсці бяспечны і эфектыўны прэпарат традыцыйнай кітайскай медыцыны для лячэння НЯК і вывучыць яго механізм дзеяння. Блакітны экстракт цыбуліны (БКЦ) - гэта вядомая кітайская травяная формула, якая выкарыстоўваецца для лячэння грыпу.8,33 Праца ў нашай лабараторыі і іншых паказала, што індыга, апрацаваны прадукт традыцыйнай кітайскай медыцыны з той жа сыравіны, што і БКЦ, праяўляе значную эфектыўнасць у лячэнні НЯК у людзей і жывёл.4,34 Аднак супрацькалітычны эфект БКЦ і яго ўздзеянне незразумелыя. У бягучым даследаванні нашы вынікі паказваюць, што БКЦ эфектыўна аслабляе запаленне тоўстай кішкі, выкліканае DSS, якое звязана з мадуляцыяй кішачнай мікрабіёты. і аднаўленне выпрацоўкі GLP-1, атрыманай з кішачніка.
Добра вядома, што НЯК характарызуецца рэцыдывавальнымі перыядамі з тыповымі клінічнымі прыкметамі, такімі як страта вагі, дыярэя, рэктальнае крывацёк і значнае пашкоджанне слізістай абалонкі тоўстай кішкі.35 Такім чынам, хранічны рэцыдывавальны каліт лячылі шляхам увядзення трох цыклаў 1,8% DSS на працягу пяці дзён, а затым сямі дзён пілі ваду. Як паказана на малюнку 1B, ваганні страты вагі і паказчыкаў DAI сведчылі аб паспяховай індукцыі хранічнага рэцыдывавальнага каліту. Мышы ў групе, якая атрымлівала BLG, прадэманстравалі аднаўленне з 8-га дня, што значна адрознівалася ад 24-га дня. Такія ж змены назіраліся і ў паказчыку DAI, што сведчыць аб паляпшэнні клінічнага стану каліту. Што тычыцца пашкоджання тоўстай кішкі і запаленчага статусу, даўжыня тоўстай кішкі, пашкоджанне тканіны тоўстай кішкі, а таксама экспрэсія генаў і прадукцыя прозапаленчых цытакінаў TNF-α, IL-1β і IL-6 у тканіны тоўстай кішкі таксама значна палепшыліся пасля лячэння BLG. У сукупнасці гэтыя вынікі выразна дэманструюць, што BLG эфектыўны ў лячэнні хранічнага рэцыдывавальнага каліту ў мышэй.
Як BLG аказвае свае фармакалагічныя эфекты? Шматлікія папярэднія даследаванні паказалі, што мікрабіёта кішачніка адыгрывае ключавую ролю ў патагенезе НЯК, і тэрапія, заснаваная на мікрабіёме і накіраваная на мікрабіём, стала вельмі прывабнай стратэгіяй для лячэння НЯК. У дадзеным даследаванні мы паказалі, што лячэнне BLG прывяло да значных змен у складзе мікрабіёты кішачніка, што сведчыць аб тым, што ахоўны эфект BLG супраць каліту, выкліканага DSS, звязаны з мадуляцыяй мікрабіёты кішачніка. Гэта назіранне адпавядае меркаванню, што перапраграмаванне гамеастазу мікрабіёты кішачніка з'яўляецца важным падыходам да разумення эфектыўнасці прэпаратаў ТКМ.36,37 Варта адзначыць, што Akkermansia - гэта грамотріцательная і строга анаэробная бактэрыя, якая жыве ў слізістым пласце кішачніка, якая дэградуе муцыны, выпрацоўвае прапіёнавую кіслату, стымулюе дыферэнцыяцыю келіхападобных клетак і падтрымлівае функцыю цэласнасці бар'ера слізістай абалонкі.26 Шматлікія клінічныя і жывёльныя дадзеныя сведчаць аб тым, што Akkermansia цесна звязана са здаровай слізістай абалонкай,38 і пероральным прыёмам Akkermansia spp. можа значна палепшыць запаленне слізістай абалонкі.39 Нашы бягучыя дадзеныя сведчаць аб тым, што адносная колькасць Akkermansia значна павялічваецца пасля лячэння BLG. Акрамя таго, Prevotellaceae_UCG-001 - гэта бактэрыя, якая прадукуе SCFA.27 Шматлікія даследаванні паказалі, што Prevotellaceae_UCG-001 быў знойдзены ў нізкай адноснай колькасці ў фекаліях жывёл з калітам.40,41 Нашы бягучыя дадзеныя таксама паказваюць, што лячэнне BLG можа значна павялічыць адносную колькасць Prevotellaceae_UCG-001 у тоўстай кішцы мышэй, якія атрымлівалі DSS. Наадварот, Oscillibacter - гэта мезафільная, строга анаэробная бактэрыя.42 паведамлялася, што адносная колькасць Oscillibacter была значна павялічана ў мышэй з UC і значна станоўча карэлявала з узроўнямі IL-6 і IL-1β і паталагічнымі паказчыкамі.43,44 Варта адзначыць, што лячэнне BLG значна знізіла адносную колькасць Oscillibacter у фекаліях мышэй, якія атрымлівалі DSS. Варта адзначыць, што гэтыя змененыя BLG бактэрыі былі найбольш бактэрыямі, якія прадукуюць SCFA. Шматлікія папярэднія даследаванні прадэманстравалі патэнцыйны карысны эфект SCFA. на запаленне тоўстай кішкі і абарону цэласнасці кішачнага эпітэлія.45,46 Нашы цяперашнія дадзеныя таксама паказалі, што канцэнтрацыі ацэтату, прапіянату і бутырату SCFA ў фекаліях, апрацаваных DSS, значна павялічыліся ў мышэй, якія атрымлівалі BLG. У сукупнасці гэтыя вынікі выразна паказваюць, што лячэнне BLG можа эфектыўна ўзмацняць індукаваныя DSS бактэрыі, якія прадукуюць SCFA, у мышэй з хранічным рэцыдывавальным калітам.
ГПП-1 — гэта інкрэцін, які ў асноўным выпрацоўваецца ў падуздышнай і тоўстай кішках і адыгрывае важную ролю ў затрымцы апаражнення страўніка і зніжэнні ўзроўню глюкозы ў крыві пасля прыёму ежы.47 Дадзеныя сведчаць аб тым, што дыпептыдылпептыдаза (ДПП)-4, агоніст рэцэптара ГПП-1, і нанамедыцынскі прэпарат ГПП-1 могуць эфектыўна палягчаць запаленне кішачніка ў мышэй.48-51 Як паведамлялася ў папярэдніх даследаваннях, высокія канцэнтрацыі КЛТК былі звязаны з узроўнем ГПП-1 у плазме крыві ў людзей і мышэй.52 Нашы бягучыя дадзеныя паказваюць, што пасля лячэння BLG узровень ГПП-1 у сыроватцы крыві і экспрэсія мРНК Gcg значна павялічыліся. Аналагічна, сакрэцыя ГПП-1 значна павялічылася ў культурах тоўстай кішкі пасля стымуляцыі фекальнымі экстрактамі мышэй з калітам, якія атрымлівалі BLG, у параўнанні са стымуляцыяй фекальнымі экстрактамі мышэй з калітам, якія атрымлівалі DSS. Як КЛТК уплываюць на вызваленне ГПП-1? Гвен Толхерст і інш. Паведамлялася, што SCFA могуць стымуляваць сакрэцыю GLP-1 праз GRP43 і GPR41.29 Нашы дадзеныя таксама паказваюць, што лячэнне BLG значна павялічвае экспрэсію мРНК GRP43 і GPR41 у тоўстай кішцы мышэй, якія атрымлівалі DSS. Гэтыя дадзеныя сведчаць аб тым, што лячэнне BLG можа аднавіць стымуляваную SCFA выпрацоўку GLP-1 шляхам актывацыі GRP43 і GPR41.
БЛГ - гэта прэпарат доўгатэрміновага безрэцэптурнага (OTC) прымянення ў Кітаі. Максімальная пераносная доза БЛГ у мышэй Куньміна складае 80 г/кг, і вострай таксічнасці не назіралася.53 У цяперашні час рэкамендаваная доза БЛГ (без цукру) для людзей складае 9-15 г/сут (3 разы на дзень). Наша даследаванне паказала, што БЛГ у дозе 1 г/кг паляпшае хранічны рэцыдывавальны каліт, выкліканы DSS, у мышэй. Гэтая доза блізкая да дозы БЛГ, якая выкарыстоўваецца ў клінічнай практыцы. Наша даследаванне таксама паказала, што яго механізм дзеяння апасродкаваны, прынамсі часткова, зменамі ў мікрабіёце кішачніка, у прыватнасці, бактэрыямі, якія прадукуюць SCFA, такімі як Akkermansia і Prevotellaceae_UCG-001, для аднаўлення выпрацоўкі GLP-1, якая паходзіць з кішачніка. Гэтыя вынікі сведчаць аб тым, што БЛГ заслугоўвае далейшага разгляду ў якасці патэнцыйнага тэрапеўтычнага сродку для лячэння клінічнага каліту. Аднак дакладны механізм, з дапамогай якога ён мадулюе мікрабіёту кішачніка, яшчэ трэба пацвердзіць з дапамогай мышэй з дэфіцытам мікрабіёты і трансплантацыі фекальных бактэрый.
Ace, воцатная кіслата; but, масляная кіслата; BLG, пандан; DSS, дэкстрансульфат натрыю; DAI, індэкс актыўнасці захворвання; DPP, дыпептыдылпептыдаза; FID, дэтэктар іанізацыі полымя; F-Con, кантроль; Экстракты фекаліяў мышэй; F-DSS, экстракты фекаліяў мышэй з калітам DSS; F-BLG, экстракты фекаліяў мышэй з калітам, якія атрымлівалі BLG; GLP-1, глюкагон-падобны пептыд-1; Gcg, глюкагон; газавая храматаграфія, газавая храматаграфія; GRP43, рэцэптар, злучаны з G-бялком 43; GRP41, рэцэптар, злучаны з G-бялком 41; H&E, гематаксілін-эазін; HBSS, збалансаваны салявы раствор Хэнкса; OTC, OTC; PCA, аналіз галоўных кампанент; PCoA, аналіз галоўных каардынат; Pro, прапіёнавая кіслата; SASP, сульфасалазін; SCFA, кароткаланцуговыя тоўстыя кіслоты; кітайская медыцына, традыцыйная кітайская медыцына; UC, язвавы каліт.
Усе эксперыментальныя пратаколы былі ўхвалены Камітэтам па этыцы жывёл Пекінскага ўніверсітэта Шэньчжэнь-Ганконгскага ўніверсітэта навукі і тэхналогій (Шэньчжэнь, Кітай) у адпаведнасці з Інстытуцыйнымі рэкамендацыямі і Палажэннямі аб жывёлах (этычны нумар A2020157).
Усе аўтары зрабілі значны ўнёсак у распрацоўку канцэпцыі і дызайну, збор дадзеных або аналіз і інтэрпрэтацыю дадзеных; удзельнічалі ў падрыхтоўцы артыкула або крытычным пераглядзе важнага інтэлектуальнага зместу; пагадзіліся прадставіць рукапіс у бягучы часопіс; канчаткова зацвердзілі версію для публікацыі; адказвалі за ўсе аспекты працы.
Гэтая праца была падтрымана Нацыянальным фондам прыродазнаўчых навук Кітая (81560676 і 81660479), першакласным праектам Шэньчжэньскага ўніверсітэта (86000000210), Фондам Камітэта па інавацыях у галіне навукі і тэхналогій Шэньчжэня (JCYJ20210324093810026) і Фондам даследаванняў у галіне медыцынскіх навук і тэхналогій правінцыі Гуандун (A2020157 і A2020272), фармацыяй Гуйчжоускага медыцынскага ўніверсітэта правінцыі Гуйчжоу, якая фінансуецца Key Laboratory (YWZJ2020-01) і Шэньчжэньскай бальніцай Пекінскага ўніверсітэта (JCYJ2018009).
1. Тан Б., Чжу Дж., Чжан Б. і інш. Тэрапеўтычны патэнцыял трыпталіду як супрацьзапаленчага сродку пры эксперыментальным каліце, выкліканым дэкстрансульфатам натрыю, у мышэй. pre-immune.2020;11:592084.doi: 10.3389/fimmu.2020.592084
2. Каплан Г.Г. Глабальная нагрузка на ВЗК: з 2015 па 2025 год. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2015;12:720–727.doi: 10.1038/nrgastro.2015.150
3. Пэн Дж., Чжэн Т. Т., Лі Сюэ і інш. Алкалоіды расліннага паходжання: перспектыўныя мадыфікатары захворванняў пры запаленчых захворваннях кішачніка. Prepharmacology.2019;10:351.doi:10.3389/fphar.2019.00351
4. Сяо Хайтэн, Пэн Цзе, Вэнь Б і інш. Indigo Naturalis інгібіруе акісляльны стрэс тоўстай кішкі і рэакцыі Th1/Th17 пры каліце, выкліканым DSS, у мышэй. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 9480945. doi: 10.1155/2019/9480945
5. Чэнь М., Дзін Ю., Тонг З. Эфектыўнасць і бяспека кітайскай фітатэрапіі з софоры жоўтай (Sophora flavescens) пры лячэнні язвавага каліту: клінічныя дадзеныя і патэнцыйныя механізмы. Prepharmacology.2020;11:603476.doi:10.3389/fphar.2020.603476
6. Цао Фан, Лю Цзе, Ша Бэньсін, Пан Х. Ф. Натуральныя прадукты: эксперыментальна эфектыўныя прэпараты для лячэння запаленчых захворванняў кішачніка. Curr Pharmaceuticals. 2019; 25: 4893–4913. doi: 10.2174/1381612825666191216154224
7. Чжан К., Цзян М., Лу А. Разважанні аб ад'ювантным лячэнні язвавага каліту з дапамогай традыцыйнай кітайскай медыцыны. Clinical Rev Allergy Immunization. 2013;44:274–283.doi: 10.1007/s12016-012-8328-9
8. Лі Чжунтэн, Лі Лі, Чэнь Т.Т. і інш. Эфектыўнасць і бяспека гранул Banlangen пры лячэнні сезоннага грыпу: пратакол даследавання для рандомізірованного кантраляванага даследавання. trial.2015;16:126.doi: 10.1186/s13063-015-0645-x